Akutni stavy v dětské neurologii

175 | www.solen.cz Vlastní analýza RYR genu probíhá ve třech krocích. Rozlišujeme scanning – metody přímého vyhledávání neznámých variant v kandidátním genu a scoring – metody přímé detekce konkrét- ních variant.  MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Ampli cation). Pro mutační analýzu genu RYR1 na úrovni genomické DNA jsou ampli kovány největší exony nesoucí varianty uvedené v seznamu MH patogenních variant uznaných EMHG (exony 2, 6, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 39, 40, 44, 45, 46, 100, 101, 102). Dodávané sondy neobsahují všechny aktuálně známé patogenní varianty. Výsledky jsou k dispozici cca do jednoho měsíce.  Scanning hot spot regionů . Pro mutační analýzu genu RYR1 na úrovni cDNA je ampli- fikováno osm překrývajících se úseků, které pokrývají mutační „hot spot“ oblasti genu RYR1 a nesou všechny varianty uvedené v seznamu MH patogenních variant uznaných EMHG (obrázek 5).  Next Generation Sequencing (NGS) , sekvenace nové generace – vyšetří se celý gen RYR1 a CACNA1S, je možno přidat řadu dalších analýz, např. neuromuskulární panel atd. NGS je velmi výkonná metoda, poskytuje velké množství informací (Riazi et al,. 2018). Slabinou je finanční náročnost a zejména složitá interpretace nálezů, která prodlužuje dobu analýzy až na tři měsíce. Diagnostický postup pro zjištění MH vychází z exaktního algoritmu doporučeného EMHG (Hop- kins et al., 2015). Celý proces je logisticky náročný, zjištění jednoznačného výsledku může trvat týdny až měsíce. Základem diagnostiky je komunikace s rodinou, rozbor a pochopení problematiky MH, stanovení diagnostického postupu. Vyšetřovací algoritmus upravujeme individuálně, s respektováním situace pacienta a všech okolností. Např. má–li pacient s rizikem MH před náročnou operací, raději souhlasí s provedením IVCT s jednoznačným a rychlým výsledkem, genetické vyšetření pokračuje dle nálezů. Terapie Terapie MH se odvíjí od závažnosti projevů. Základním a okamžitým úkonem při jakémkoliv podezření na MH je přerušení přívodu spouštěčů MH, aplikace 100% kyslíku, ukončení či odložení operace. V případě nutnosti pokračování operačního výkonu převedeme anestezii na totální intra- venózní (TIVA). U většiny mírných forem je další terapie pouze symptomatická. Po stabilizaci stavu probíhá diagnostika. Při rozvoji závažné MH reakce, která může vyústit do MH krize či primárně fulminantního průběhu MH epizody, zahájíme okamžitou resuscitační péči s aplikací kauzálního léku, kterým je dantrolen (stejnojmenný preparát Dantrolen). Přesný mechanizmus jeho působení na RYR1 receptoru není znám, jednoznačně však vede k jeho stabilizaci a zabraňuje dalšímu uvolňování kalcia.